細胞計數板的血細胞計數誤差分別來(lái)源于技術(shù)誤差和固有誤差。其中由于操作人員采血不順利,器材處理、使用不當,稀釋不準確,細胞識別錯誤等因素所造成的誤差屬技術(shù)誤差;而由于儀器(計數板、蓋片、吸管等)不夠準確與精密帶來(lái)的誤差稱(chēng)儀器誤差,由于細胞分布不均勻等因素帶來(lái)的細胞計數誤差屬于分布誤差或計數域誤差。儀器誤差和分布誤差統稱(chēng)為固有誤差或系統誤差。技術(shù)誤差和儀器誤差可通過(guò)規范操作、提高熟練程度和校正儀器而避免或糾正,但細胞分布誤差卻難于*消除。因此,搞好紅細胞計數的質(zhì)量控制一般需采用以下措施。1.避免技術(shù)誤差,糾正儀器誤差
(1)所用器材均應清潔干燥,計數板、血蓋片、微量吸管及刻度吸管的規格應符合要求或經(jīng)過(guò)校正。①計數板的鑒定:要求計數室的臺面光滑、透明,劃線(xiàn)清晰,計數室劃線(xiàn)面積準確。必要時(shí)采用嚴格校正的目鏡測微計測量計數室的邊長(cháng)與底面積,用微米千分尺測量計數室的深度。美國國家標準局(NBS)規定每個(gè)大方格邊長(cháng)的誤差應小于1%,即1±0.01mm,深度誤差應小于2%,即0.1±0.002mm。若超過(guò)上述標準,應棄之不用。②血蓋片應具有一定的重量,平整、光滑、無(wú)裂痕,厚薄均勻一致,可使用卡尺多點(diǎn)測量(至少在9個(gè)點(diǎn)),不均勻度在0.002mm之內。必要時(shí)采用平面平行儀進(jìn)行測量與評價(jià),要求呈現密集平行的直線(xiàn)干涉條紋。較簡(jiǎn)單的評價(jià)方法是將潔凈的蓋片緊貼于干燥的平面玻璃上,若能吸附一定的時(shí)間不脫落,落下時(shí)呈弧線(xiàn)形旋轉,表示蓋片平整、厚薄均勻。同時(shí),合格的蓋片放置在計數室表面后,與支持柱緊密接觸的部位可見(jiàn)到彩虹。精選出的蓋片與其他蓋片緊密重合后,在掠射光線(xiàn)下觀(guān)察,如見(jiàn)到完整平行的彩虹條紋表示另一枚蓋片質(zhì)量也符合要求。③目前臨床實(shí)驗室多采用一次性微量采血管采集毛細血管血,除注意定點(diǎn)購買(mǎi)使用信譽(yù)較好廠(chǎng)家的產(chǎn)品外,還應對每一批量的采血管進(jìn)行抽樣檢查,可通過(guò)水銀稱(chēng)重法或有色溶液比色法進(jìn)行校正,誤差不應超過(guò)±1%。
(2)紅細胞稀釋液應等滲、新鮮、無(wú)雜質(zhì)微粒。
(3)嚴格操作,從消毒、采血、稀釋、充池到計數都應規范,尤其應注意的是血樣稀釋及充池時(shí)既要作到充分混勻,又要防止劇烈震蕩為破壞紅細胞。必須一次性充滿(mǎn)計數室,防止產(chǎn)生氣泡,充入細胞懸液的量以不超過(guò)計數室臺面與血蓋片之間的矩形邊緣為宜。